子宫组织富含平滑肌、内膜上皮细胞及大量血管，结构致密，细胞间连接紧密。传统机械研磨方式容易破坏细胞膜完整性，导致活率偏低；而普通胰酶配方消化时间难以把控，过度消化同样造成大量细胞损失。

通用组织消化酶MJ022可为多种实验组织定制配方，温和高效，在保证消化效率的同时较大程度低维持细胞活性，适用于子宫、肌肉、皮肤等多种纤维性/软组织。

实验材料清单

1. 实验对象：小鼠子宫组织

2. 消化试剂：MJ022 通用消化酶

3. 终止试剂：MJ102 酶解终止液

4. 裂红试剂：MJ103 红细胞裂解液 + FBS 200 μl

5. 纯化试剂：MJ101 去碎片试剂

6. 耗材：消化管、滤网、离心机

7. 缓冲液：无菌 PBS（漂洗、重悬用）

8. 检测试剂：AOPI 染料 + 自动细胞计数仪

单细胞悬液制备仪对小鼠子宫组织悬液制备的实验步骤详解

1. 开机准备：连接仪器电源，打开开关，选好子宫对应程序备用。

2. 试剂解冻：将MJ022消化酶和MJ102终止液提前备好。（消化酶溶解后建议分装成小瓶，避免反复冻融影响活性）切勿用温热水，避免酶活性提前下降。

3. 取材：小鼠颈椎脱臼处死，迅速取出子宫，置于含 PBS 的培养皿中，放在冰上保存，减少细胞损伤。

4. 剪碎 · 加酶：用 PBS 漂洗子宫组织，眼科剪充分剪碎，放入消化管，加入MJ022 通用消化酶。

5. 核心消化步骤：将消化管放至净信单细胞悬液制备仪模块上，选择“子宫”对应程序，点击运行。中途可暂停查看消化状态，判断消化充分后及时停止，避免过消化。

6. 过滤 · 终止消化：用滤网过滤消化液，去除未消化组织块；按比例加入MJ102终止液，快速灭活酶活性。

7. 离心 · 裂红 · 去碎片：离心后弃上清，加入红细胞裂解液，冰上裂红几分钟，加入PBS+MJ101去碎片试剂，再次离心弃上清，洗涤细胞

8. 重悬 · 获得单细胞悬液：加入少量无菌 PBS，轻柔吹打混匀管底沉淀，即得到高活性单细胞悬液，可用于后续实验。

9. AOPI 染色 · 细胞计数：AOPI 双荧光染色后上自动细胞计数仪检测，读取细胞活率及浓度数据。

实验注意事项

1. 试剂保存：MJ022 消化酶干粉时可4°C保存，溶解后须低温保存。

2. 裂红时间严格把控：MJ103 裂红液冰上作用时间控制在几分钟，时间过长会对目的细胞产生影响，时间过短则裂红不彻底。

3. 避免过度洗涤：清洗单细胞悬液次数不宜过多、时间不宜过长，否则会造成细胞损失，影响最终收获量。

4. 低温操作：取材后，除了仪器消化 37°C，其余操作组织始终置于冰上，离心、重悬等步骤均在低温条件下进行，最大程度保障细胞活性。

实验结果分析

AOPI 细胞计数仪检测结果：活率 86.01%。使用净信单细胞悬液制备仪可获得高活性单细胞悬液，满足流式细胞术、单细胞测序等高要求下游实验的样本需求。